培地がどんどん赤くなります

学校で癌細胞を扱っており、液体培地RPMI1640を使っております。

液体培地の封を開けて2ヶ月くらい経過すると培地が赤っぽくなっています。
培地にはメチルレッドが入っているのでアルカリ性になって赤くなるということはわかるのですがふたをきちんと閉めた状態で冷蔵保存しているのにｐHがあがっていくのはなぜなのでしょうか？
普段培地は10％FBSを添加した状態で冷蔵保存していますのでFBS添加が原因でしょうか？
できれば培地の管理で大事なことなども含めてアドバイスお願いします。

No.1 ベストアンサー 回答者： noname#24872 回答日時： 2006/05/28 11:31

培地が徐々に赤くなるのは、培地からＣＯ２（炭酸ガス）が逃げているためです。

血清は関係ありません。

ＲＰＭＩ１６４０で使われているｐＨ緩衝液には、重炭酸イオンが使われています。重炭酸イオンは、少しづつＣＯ２と水に分解し、生じたＣＯ２は空気中に逃げていきます。

ＣＯ２インキュベータの中では、空気中には５％のＣＯ２が含まれていますから、逃げていくＣＯ２と溶け込むＣＯ２が釣り合って、培地のｐＨは変化しません。しかし、培地ビンのふたを開けたときにビンの中に入り込むクリーンベンチの内部の空気には、ＣＯ２はほとんど含まれていません。

したがって、ビンを開け閉めするたびに、ビンの中のＣＯ２を含む空気は失われ、ＣＯ２を含まない空気に置換されます。この空気中に、培地からＣＯ２が放出される、ということの繰り返しで、培地はアルカリに傾いていくのです。

ですから培地のｐＨの上昇を防ぐには、使用したあと培地ビンの中の空気を、５％ＣＯ２を含む空気に置換すればよいのです。このためのガスボンベも市販されています。もっとも、そこまでしているラボはあまりありません。

２ヶ月間同じ培地を使用しているとのことですが、これはあまり好ましくありません。培地の成分の中には、グルタミンなど比較的分解しやすい成分も含まれていますし、開け閉めを繰り返すとコンタミの危険性も増えます。ｐＨの問題は抜きにしても、１ヶ月ぐらいで使い切る量に小分けしておいて、開封後はあまり長く使い続けない方が良いと思います。

Ｐ．Ｓ．培地に使われているｐＨ指示薬は、メチルレッドではなくフェノールレッドです。メチルレッドは酸性側が赤ですね。

この回答へのお礼

ありがとうございました。
pH緩衝液のCO2の関係だったんですね。
炭酸飲料の気が抜けるのと同じ原理かな？と思いました。
分かりやすい回答ありがとうございました。
ガスボンベまではできないのでなるべくpHを上昇させないように分注して使おうと思います。

お礼日時：2006/06/01 15:24

No.2 回答者： MIYD 回答日時： 2006/05/28 19:11

>培地の管理で‥

シャーレやフラスコに入れて、
一晩(数時間でも大丈夫ですが)インキュベーターに入れておけばpH、温度が安定します。
その後で細胞を撒くというやり方もあります。

この回答へのお礼

インキュベーターに入れとけば確かにpHなども安定しますよね。ただ最近うちのインキュベーターでのコンタミが発生したのでこの方法はちょっと心配です…。
回答ありがとうございました。

お礼日時：2006/06/01 15:28