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こんにちは

今、細胞を使った実験をしています。
96wellプレートを使った実験なのですが
『1wellに細胞を0.7×10の4乗個入れなさい』
と指示がありました。

1wellが50マイクロリットル入るので

0.7×10の4乗/50マイクロリットル
(この解釈の仕方でよいのかも自信がありません)

まず、0.7×10の4乗/50マイクロリットルを
計算をしやすくする為に、1ミリリットル中には
何個入っているかを計算していたところ
次の二通りの意見が出てきました。

1) 0.7×10の4乗/50マイクロリットル は 
14×10の4乗/1ミリリットル

50マイクロリットル→1ミリリットル(1000マイクロリットル)
は20倍なので細胞も20倍した。

2) 0.7×10の4乗/50マイクロリットル は 
35×10の4乗/1ミリリットル

  0.7×50=35

どちらが正しいでしょか?

私の意見は1番なのですが、あとの二人は2番です。
細胞のカウントの方法は独特なので、戸惑ってます。

『1wellに細胞を0.7×10の4乗個入れる』という意味の
捕らえ方も間違ってるのではないかと不安になってます。

とても困ってます(;_;)
どなたかお詳しい方、または96wellに細胞を入れて実験されてる方
教えてください。
よろしくお願いします。

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A 回答 (3件)

96wellプレートを使った実験なので、1つのwellに7000個の細胞を入れなさい。

ということはわかっているみたいですね。
細胞の数え方としては1)が正しい答えです。
50マイクロリットル中に0.7×10の4乗個の細胞がいるわけですから、細胞の密度は14×10の4乗個/1ミリリットルになります。
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『1wellに細胞を0.7×10の4乗個入れなさい』


とのことならこの意味の通り1wellに7000個の細胞を入れればいいと思います。
ひとつ気になるのは「1wellが50μl入るので」という意味です。
プロトコールがそう指示しているのでしょうか?
もし細胞数だけ指定して書いてあるなら計算しやすいように7×10の4乗個/mlをを100μl入れてもよいと思うのですが。
96穴なら200μlまでは入るはずですし(^^)
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ついでに言えば、数学的にも(1)が正しいですよ。



0.7*10^4:50 = x:1000
50x = 1000*0.7*10^4

  1000 * 0.7*10^4
x = ---------------- = 20 * 0.7 * 10^4
     50
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Aベストアンサー

ずばり、一般には計数盤を用いて細胞を数えられていると思います。
実際に僕もそうやって数えているんで。計数盤に細胞懸濁液を入れて
光学顕微鏡で細胞数をカウントします。実際に計数盤を見たことがあ
ればいいんですが、計数版にはある一定の面積を持ったマス目があります。
深さ(depth)も決まっていますから、体積が分かります。これによって、
細胞数(個/ml)が出るという訳です。
 (例)1マスが1/16mm2で深さが1/5mmだとすると、8マス分の体積が体積は1/10mm3、つまり1/10000mlですよね。8マスでカウントされた細胞数が100個だったとすると、、、10の6乗個/mlになるわけです。実際は誤差を少なくするために、何回か数えた数を平均したりしますけど。ある程度慣れると、シャーレを観察するだけで、どれくらいの細胞数がいるかが、分かるようになります(実験内容にもよりますが・・・)。始めの内は、継代の度に細胞数を数えて、ダブリングタイム(1個の細胞が2個に分裂するのに要する時間)を正確に捉えることをすればいいと思います。長文になりましたが、参考になればと思います。

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