![](http://oshiete.xgoo.jp/images/v2/pc/qa/question_title.png?e8efa67)
![](http://oshiete.xgoo.jp/images/v2/common/profile/M/noimageicon_setting_01.png?e8efa67)
PCRについての質問です。
これまで普通に増幅できていたのに、突然PCRがうまくいかなくなりました。
コンタミなどの影響も考え、抽出精製などを行ったのですがやはりうまくいきません。何か他に考えられる原因はないでしょうか?
サーマルサイクラーが正常に動作しているか確認するための診断テストをしたところ、94℃から40℃に冷却する場合の最大冷却速度が規格値より0.2℃/secほど低くなりました。この0.2の差というのは反応に影響するものでしょうか?
また、フェノクロが劣化していた場合にPCRに影響を与えることなどはありますか?
困っています。どなたか教えていただけると嬉しいです。
No.1ベストアンサー
- 回答日時:
こんにちは。
サーマルサイクラー云々は、わたしは関係ないと思います(多分)。
それより、PCRというのは初めてのテンプレート、プライマーペアの話ですか?もしそうなら、今までに実績のある、必ずかかるテンプレート、プライマーでやってみたらいかがでしょう。まずはこれを確認した方が良いでしょうね。もしこれがかからなければ、PCRの試薬の問題ではないでしょうか?酵素が失活しているとか。
それをクリアーした上で、それでも初めてのテンプレートとプライマーペアで増幅できない、と言う段になったら、実にいろいろな要因が考えられますよね。PCR関連の実験書をひもといて、ひとつひとつ条件を確認するしかないと思います。
フェノクロが古くてpHがくるっているとDNAがフェノクロ側にロスされてしまう、とはよく実験書に書いてありますよね。心当たりがあるなら作り直した方が良いかもしれませんよ。
この回答への補足
初めまして。丁寧な回答をありがとうございました。
テンプレートとプライマーの件ですが、これは今まで使用していた組み合わせで
増幅もきちんとできていることを確認しています。それが突然かからなくなったのでおかしいなと思い、試薬の問題も検討したところです。
すると、別のテンプレートとプライマーの組み合わせではきちんと増幅ができたので、試薬の問題でもないことがわかりました。
一般にいわれているような原因は一応試したつもりなのですが、
なぜかうまくいかないのです。プライマーがこわれていたりするのでしょうか・・・?もう少し検討してみます。どうもありがとうございました。
No.2
- 回答日時:
こんにちは。
いやー、私の経験だと、プライマーがダメになるってことは、普通に使っている分にはまずありえないとおもいます。
それよりも、テンプレートの劣化でしょうか?そのテンプレートで、何かハウスキーピングジーンでもインターナルコントロールにしてかけてみてはどうでしょう。
一般的な回答しかできませんが...。PCRがかからない悲しさ、わかりますよ。がんばってください。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
似たような質問が見つかりました
- 地球科学 屋外にダイヤモンドや金貨を庭先に置いておいた場合、何年くらいで劣化や風化しますか? 3 2022/09/11 05:01
- 食中毒・ノロウイルス コロナピーク 増えた原因 5 2022/07/15 18:26
- 経済学 マクロ経済学の租税に関する質問です。 3 2023/03/28 17:15
- 統計学 処理Aと処理A+Bの2群の差から、AとBの効果や相対的重要性を定量したい 5 2023/02/22 09:42
- 環境学・エコロジー 地球温暖化って深刻な問題でしょうか? 7 2022/04/28 20:50
- 哲学 脳内ニュートン力学の詩 2 2023/04/23 16:13
- 環境・エネルギー資源 地球温暖化は本当に深刻な問題でしょうか? 7 2022/04/03 12:17
- 政治 日本サラリーマンの実質賃金が30年上がらない理由と解決策と 4 2022/09/17 19:57
- その他(病気・怪我・症状) 新型コロナのPCR検査を受けるタイミングについてお教えください。 2 2022/04/13 10:21
- 新卒・第二新卒 自衛官候補生(海上)に落ちて(不合格になって)しまいました。 対策はしっかりとしていて、万全の状態で 1 2023/07/07 19:53
このQ&Aを見た人はこんなQ&Aも見ています
おすすめ情報
このQ&Aを見た人がよく見るQ&A
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
転写反応には、どうしてプライ...
-
PCRでバンドが2,3本出てしまい...
-
変異体構築PCRについて
-
PCRの失敗について
-
DNAを室温で放置してしまい、DN...
-
DNA塩基配列から推定されるアミ...
-
「ピリカレ」「えみな」で汚れ...
-
夏場の水道水って飲んでも大丈夫?
-
制限酵素地図の作成
-
早朝にセミが10分間くらい鳴く...
-
電気泳動
-
光学活性についてです。
-
大腸菌の世代時間
-
遺伝子の塩基配列の問題がわか...
-
高いとこから下の景色をながめ...
-
ATP・ADP・AMPについて
-
Km値の小さい、大きいについて。
-
大腸菌の野生株とDH5α株
-
DNAって何通りあるんでしょうか?
-
遺伝子操作
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
PCRの失敗について
-
PCRで複数のバンドがでます。
-
エキストラバンドがでる理由
-
PCR組成とDNAのスメア
-
PCRとシークエンス反応
-
PCRでバンドが2,3本出てしまい...
-
転写反応には、どうしてプライ...
-
DNAを室温で放置してしまい、DN...
-
学生実験のPCRについて教えてく...
-
RT-PCRのランダム,オリゴdTプ...
-
プライマーダイマーが出てしま...
-
RAPDマーカーって何ですか?
-
DNA断片分析のPCR法で使うMaste...
-
mRNA発現量を求める実験法
-
PCRでDNAが増幅されないのは・・
-
プライマーの劣化凍結融解について
-
突然PCRがうまくいかなくなりま...
-
アニーリングの温度設定について
-
定量性に欠けると言われるはな...
-
質問です!
おすすめ情報