No.1
- 回答日時:
1,2については
Recombinant DNA second edition ワトソン・組換えDNAの分子生物学
などの参考書を読まれた方がよくわかると思います。
ベクターを構成するそれぞれの部分、つまりoriやプロモーターなどをそれぞれ勉強していただければわかると思います。
例えばブルースクリプト(TA vector)に遺伝子組み込んでも正しく発現しませんよね。何でかな?これを発現用のpGEXに入れればちゃんとできる。目的にあわせて構造が違うのです。
3については上の二つがわからないと難しいでしょう。ホスト株の事や、コピー数、誘導条件などで選択します。それ以外にもいろいろありますけど。
No.2ベストアンサー
- 回答日時:
1について
基本的に同じで、発現ベクターをクローニングに使うこともできますが、クローニングベクターとは一般的にカラーセレクションなどをできるものをいいます。
2について
通常のたんぱく質にはプラスミドで十分です。
大きなフラグメントの場合、テンプレート(cDNAなど)が少ない場合、高いタイターを得たい場合などファージを使います。
3について
発現ベクターについては、fusion protein作成用のtagやあるたんぱく質がはじめから含まれているようなものや、いろいろなプロモーターを持つものがあります。
あとからどのように精製したいか、(抗体を使いたいとか、GSTで精製したいとか、キレートカラムを使いたいとか)また、どの生物で発現させたいか(bacteriaならlac promotorとか、mammalならcytomegallovirusとか)によって、説明書をよく見て選択してください。
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