ただいま,リンカーを付加したライゲーションで悪戦苦闘しています.
何回やってもだめなので技術的な問題だと思われますが,みなさんのやっているリンカーライゲーションのプロトコールやなにかアドバイスがあったら教えて下さい.
ちなみに,8キロベースのベクターに400ベースのインサートを入れようとしています

A 回答 (2件)

リンカーライゲーションって制限酵素切断配列を両端に付加したインサートをベクターにライゲートすることですよね?



だとすれば僕も苦労しました.
自身の結果から得た成功の秘訣は
1.制限酵素による切断を確実にする
2.両端の切断に使う制限酵素が異なる場合もCIAP処理をする
3.インサートはとにかく大量に調製する
です!
「量」!これがなによりのポイントでしょう(笑)
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直接の回答ではなく申し訳ありません。



あなたが「技術的な問題」だとお思いであれば,実際に行なっている方法のどこに問題があると考えているかを示し,それに対するアドバイスをお尋ねになった方が良いと思います。

ただ,この場であなたのやり方を説明するのが困難なのは,お分かりになると思います。それと同じ様に,技術的な問題に対して文章で回答するのはかなり困難を伴うと思います。

技術的問題であれば,この様な場よりも,身近な経験者にお教え願うか,あるいは,論文や書籍でその手法を使いこなしている方にお教え願った方が確実だと思います。
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ベクター同士が順方向でつながった場合、制限酵素処理では見分けがつかないような気がしますが、細胞に発現する際に何か問題が起こってきますでしょうか?

よろしくお願いいたします。

Aベストアンサー

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お知り合いの韓国の方の名前には、実は素敵な意味があった、とかのお話でもOKです!

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韓国人です。

名付け方はですね、「行列」って言う規則で決められた字を使って名付けます。格家門にそれぞれの「行列」のチャートがあって、生まれた世代によって決められた1字にいい意味の字を選んで2文字又は1文字の名前にすることが昔からの慣習です。
名前をみればどの姓氏(家門)の何代目であるかが分かります。例えば、金氏家門で20代目に生まれた赤ちゃんの場合、20代目の行列の字である「正」に、いい意味の「優」を組み合わせますと、金正優(キムジョンウ)って名前になります。兄弟やいとこの場合も同じく20代目の字を使って名付けます。この金さんの子供は21代目の字を使って名付けられます。

最近はハングルの名前も増えてますが、公共機関などでは名前のハングルと漢字の両方の記入を求められることが多いです。

韓国人に多い名前ベスト15は...

男性-スンジュン、ミンス、ミンウ、ジフン、ジュンホ、ソンミン、ジョンミン、ミンソク、ジェミン、ジョンフン、ドンヒョン、ハヌル、ヒョンウ、ジュンソ、ミンソ、ミンホ、ヒョンス、スビン、ヨンジュン

女性-スビン、ミンジ、ジへジヨン、ジウン、ユジン、ジヒョン、スジン、イェジ、イェジン、イェリム、ヒョンジョン、ウンヨン、ダビン、ウンジ、ジス、ミンジョン、スミン、へジン

ちなみに私の名前もベスト15です(^^;
10~20代に多い名前ですね。
小学生のとき、同じクラスに同じ名前の子が3人もいました。漢字は違いましたが、ありふれた名前なんで気に入らなかったんです(^^;

韓国人です。

名付け方はですね、「行列」って言う規則で決められた字を使って名付けます。格家門にそれぞれの「行列」のチャートがあって、生まれた世代によって決められた1字にいい意味の字を選んで2文字又は1文字の名前にすることが昔からの慣習です。
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一般的にセキツイ動物の肺は,両生類,は虫類,鳥類,ほ乳類の順に表面積が大きくなり,気体交換効率が高くなっているようです。それはどうしてか,くわしく教えて下さい。

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