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ただいま,リンカーを付加したライゲーションで悪戦苦闘しています.
何回やってもだめなので技術的な問題だと思われますが,みなさんのやっているリンカーライゲーションのプロトコールやなにかアドバイスがあったら教えて下さい.
ちなみに,8キロベースのベクターに400ベースのインサートを入れようとしています

A 回答 (2件)

リンカーライゲーションって制限酵素切断配列を両端に付加したインサートをベクターにライゲートすることですよね?



だとすれば僕も苦労しました.
自身の結果から得た成功の秘訣は
1.制限酵素による切断を確実にする
2.両端の切断に使う制限酵素が異なる場合もCIAP処理をする
3.インサートはとにかく大量に調製する
です!
「量」!これがなによりのポイントでしょう(笑)
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直接の回答ではなく申し訳ありません。



あなたが「技術的な問題」だとお思いであれば,実際に行なっている方法のどこに問題があると考えているかを示し,それに対するアドバイスをお尋ねになった方が良いと思います。

ただ,この場であなたのやり方を説明するのが困難なのは,お分かりになると思います。それと同じ様に,技術的な問題に対して文章で回答するのはかなり困難を伴うと思います。

技術的問題であれば,この様な場よりも,身近な経験者にお教え願うか,あるいは,論文や書籍でその手法を使いこなしている方にお教え願った方が確実だと思います。
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