【復活求む!】惜しくも解散してしまったバンド|J-ROCK編

現在HACH社のUV-visを使用しています。
DR-4000Uですが、今は会社ではないのでシングルビームか
ダブルビーム仕様かわかりません。
ただ、セルを設置するのは1つしかできない物です。
最近購入したばかりなのですが、かなり濃度の薄い試料の
吸光度を測定すると、マイナス表示されます。
-0.002とかなら誤差かと思うのですが、ひどいのは
-0.01位になります。
最初にベースラインをイオン交換水でとっています。
一度、イオン交換水でベースラインをとったあと、
そのセルのままスキャンをすると、-0.002など表示されます。
なぜこのようなことが起こるのでしょうか?
いくらベースラインを取り直してもマイナスが出てきます。
どうしたらよいでしょうか?

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A 回答 (2件)

> -0.01ABSもの誤差が出てきた場合は原因は試料溶液の


> 微量な汚れの可能性があるでしょうか。

「汚れ」で「試料溶液」の方が「ブランク溶液」より透過光量が多くなることは
非常に考えにくいです(逆は一般的ですが)。

ベースラインをとってから測定を続けて行くと、どんどん一方向にずれていく
ようであれば、装置がらみの問題があるかも知れません。

設置環境に問題(ランプハウスに風が当たる、周囲温度が変動する等)は
ないですか?
Powe-ON後、装置・光源が安定するまである程度待ってから測定を始めて
いますか?

これらに問題がなければ、装置自身の問題の可能性を疑うことも必要かも
知れませんね。
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この回答へのお礼

>「汚れ」で「試料溶液」の方が「ブランク溶液」より透過光量が多くなることは
非常に考えにくいです(逆は一般的ですが)。

そうですよね^^;わかっていながら、あまりにも原因がわからなかったので
そう思ってしまいました。
室温も一定にし、風も当たらない室内で行っていますので
多分その点は大丈夫と思います。
装置が自動的にランプワーミングの時間を取るので、3分ほど待ってから
READYになって測定を開始しています。
まだ購入して1ヶ月も経っていないのですが、不良品なんですかね…。
そうなれば販売元に聞くべきでしょうか。
ありがとうございました。

お礼日時:2005/09/25 21:17

> そのセルのままスキャンをすると、-0.002など表示されます。



-0.002Abs=100.46%T です。100%Tに対する誤差がわずか0.46%Tですから、このクラス
の分光光度計では精度はそんなものじゃないでしょうか。Specでも"Linearlity"と
いう表現になっていますが、±0.002Absとあります(下記URL)。
(DR/4000Uは"split-beam monochromator"とあるので何らかの安定化はされている
かも知れませんが、基本的に方式はシングルビームのようですね。)

ベースライン測定後にすぐ測定してもこうなるのかとか、どの波長域でこうなるのか、
とか書かれていないのではっきりしたことは言えませんが、-0.01Absだと102.33%T
ですから、誤差2.33%T。こちらは少し大きいですね。

参考URL:http://www.hach.com/hc/view.document.invoker/Ven …
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この回答へのお礼

ありがとうございます。
ベースライン測定後すぐにいつも測定をしています。
ふだん200-750nmで測定していて、
300-750nmあたりでマイナスがあらわれますが、ひどいもの
(試料濃度がかなり薄いもの、濃度がほとんどゼロのもの)では測定領域全般に
マイナスがあらわれます。
-0.002ABS程度なら、0と書き換えてもいいでしょうか?
-0.01ABSもの誤差が出てきた場合は原因は試料溶液の
微量な汚れの可能性があるでしょうか。
-0.01ABSほどの誤差は誤差ではなく、なんらかの原因があるからでしょうか?
一度ろ過してから測定すべきでしょうか。

お礼日時:2005/09/25 00:09

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たまにサンプルブランク等のABSの測定値が-0.002というように負の値になるときがあります。
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私は「0」として扱っているのですが、同僚は「-」として扱っています。
(なんともお粗末な会社ですが)

Aベストアンサー

> ・・・サンプルブランク等のABSの測定値が-0.002・・・

-0.002Abs=100.46%T です。理屈の上では「サンプルブランクを100%T=0Abs」とする
わけですが、100%Tにだって当然ノイズ・誤差・ドリフトが乗りますから、"100.46%T"
くらいの値なら示しても何らおかしくないと思います。

なので、「-0.002Abs」の値をそのまま使えば良いだけです。自動定量ソフトを内蔵した
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> マイナス側の数値は保証されていないので・・・ 

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 検量線を引くための標準液は、0を含めて、6点取っています。標準液を調製しやすいように、例えば、0、1、2、3、4、5 mg/mlなど。これを5点検量(0は、普通対照に利用するので)と称しています。4点の場合もあります。
 基本は、グラフを書いて、1点がヅレていたら、それは無視して検量線を引く。2点ズレテイタラ、こりはヒドイので、やり直す、と言うのが教科書です。

 正確にするために検量線を2連(2回)して、その平均を取る、というバカな教えをする教員もいますが(それなら、2連より10連、100連の方が正確、と毒づいています)。
 
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>無理やり線でつなぐのかなと思っているのですが
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Q検量線

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検量線を引くとは、測定器の固有差を見極め、その固有差を見極めた上で、未知試料について正確な測定を行うことを目的にしています。
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Q分光光度計・吸光度とは?

ある液体の濃度測定をお願いしたところ、「分光光度計にて595nmにおける吸光度を測定する」と言われました。僕にはさっぱり意味が分からず、結果の数値を見ても人に説明できません。で、分光光度計とは?吸光度とは何でしょうか?何を測定したのでしょうか?まったくの無知なもので、よろしくお願いします。

Aベストアンサー

 分光光度計とは、光源から出た光を波長ごとに分ける部分(分光部)と、分けた光を試料に当てて光の弱くなる程度を測定する部分(光度計)からなります。
 試料に当てる光の強さをXとし、試料を通過した後の光の強さをYとすると、
 まず、透過率を求めます。透過率・・・T(%)=X/Y×100
 もっとも、普通に光度計で則って居する場合、純水などをいれた空セルで100%合わせをして、次にセル内を試料に入れ替えて測定するので、透過率は装置に表示され、計算する必要はありません。
 次に、この透過率から吸光度を求めます。
 吸光度=-log(T/100)
 なぜ吸光度を計算するかと言うと、溶液中の光を吸収する成分の濃度が吸光度と比例するからです。
 予め濃度の分かった標準試料を用いて、濃度と吸光度の関係を求めて「検量線」を作っておき、その他試料の吸光度を測定する事で濃度が求められます。

 測定する色調により波長は変わります。
 検量線作成に先立って、標準試料の場合の吸収スペクトル(広い波長範囲にわたり、波長と光の吸収度の関係をグラフ化したもの)を採り、測定上最適な波長を決めます。
 普通は、光の吸収の一番大きい波長を選びますが、その他条件も加味して決定する必要は有ります。
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 なお、#2さんの提示されている「Lanbert-Beerの法則」(ランバート・ベールのほうそく)は基本的かつ重要で有名な法則です。

 P.S 吸光度の計算例
 透過率=85.3%だとすると、
 吸光度=-log(85.3/100)=0.069
 (昨今の分光光度計は吸光度も自動表示されるので、いちいち計算する必要は無いのですが、原理を知っている事は大切です)
 
 

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Qブランク値って・・・

吸光光度法のブランク値ってなんですか?

Aベストアンサー

ブランク(blank)=空白。
測定したい溶質を含まない溶媒だけを分光光度計のセルに入れて測定し、
検量線のゼロ点にあたる値を測ります。これがブランク値です。
これにより、妨害物質や使用セルの光路長に由来する誤差の影響を
排除することができます。

Q分光光度計での測定手順

分光光度計である溶液の濃度を測定しています。
人によって二つのやり方があることが分かり、どちらが正しいかを検討しています。
ちなみにダブルビームです。
(方法1)
・キュベットAとBに水を入れてゼロ補正
・次にキュベットAにブランク、キュベットBにサンプルを入れて吸光度の差を測定する。
(方法2)
・キュベットAに水、キュベットBにブランクを入れてゼロ補正
・次にキュベットAに水、キュベットBにサンプルを入れて測定。
・ブランクとサンプルのそれぞれの吸光度の差を計算する。

どちらでも良いという人と、差があるようだという人と分かれています。どなたか教えてください。

Aベストアンサー

以前、分光光度計の設計をやっていました(早い話、作る方のプロでした)。

操作上のミスや誤差を抜きにして言えば、装置的には優位な誤差に違いは
ないように思いますが、分光光度計の設計者が想定している使用方法は、
きっと(方法1)ですね(ひょっとして私だけだったらごめんなさい)。

関係しそうなポイントをいくつか挙げておきます。

1.ゼロ補正は、再現可能性の高いものを基準として実施した方が良い。
  つまり、今日も明日も明後日も、特別なアクセサリを使用せず、
  いつものキュベットで普通の水溶液で吸光度測定をする限り(有機溶媒
  系で測定とかでなく)、試料Aを測定するにも試料Bを測定するにも、
  いつも0Absの基準は同じものにするのが望ましいです。そのためには、
  "常に同じ"蒸留水同士で取るのがベターと考えます。

2.ダブルビームの分光光度計は基本的に、サンプル溶液とブランク溶液
  の比をリアルタイムで測定することを前提に設計しています。
  (きっとどのメーカーも)

ただし、これは作る側の立場で考えていることなので、使う側の方が
「こちらの方が理屈でも経験上でも良い結果が出る」ということであれば、
決してそれを否定するものではありません。
特に、分光光度計の設計者の多くは物理屋であり、使う方々の多くはきっと
化学屋さんである点は要注意かも知れません。

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ないように思いますが、分光光度計の設計者が想定している使用方法は、
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Q吸光度と透過率

 早速質問させていただきたいのですが、吸光度と透過率にはどのような関係があるのでしょうか?ランベルトベールの法則を利用すると言うのはわかるのですが、吸光度は透過度の逆対数であると理解しているのですが、どう関係しているか分かりません。教えてください。

Aベストアンサー

私も時々分らなくなることがあります。苦手のひとつですね。分光計で考える良いと思います。試料溶液と溶媒単独を同じ光源からのそれぞれ通過させ、溶媒単独と通過してきた光の強さ(光電管の電圧)I0 と試料溶液を通過してきた光の強さ(光電管の電圧)Iとして、縦軸に光学密度(吸光度とも称されます)log(I0/I)又は透過率(I/I0)、横軸に波長又は波数のチャートが得られます。それ故、吸光度は透過率の逆数の対数になりますね!

Qエクセル STDEVとSTDEVPの違い

エクセルの統計関数で標準偏差を求める時、STDEVとSTDEVPがあります。両者の違いが良くわかりません。
宜しかったら、恐縮ですが、以下の具体例で、『噛み砕いて』教えて下さい。
(例)
セルA1~A13に1~13の数字を入力、平均値=7、STDEVでは3.89444、STDEVPでは3.741657となります。
また、平均値7と各数字の差を取り、それを2乗し、総和を取る(182)、これをデータの個数13で割る(14)、この平方根を取ると3.741657となります。
では、STDEVとSTDEVPの違いは何なのでしょうか?統計のことは疎く、お手数ですが、サルにもわかるようご教授頂きたく、お願い致します。

Aベストアンサー

データが母集団そのものからとったか、標本データかで違います。また母集団そのものだったとしても(例えばクラス全員というような)、その背景にさらならる母集団(例えば学年全体)を想定して比較するような時もありますので、その場合は標本となります。
で標本データの時はSTDEVを使って、母集団の時はSTDEVPをつかうことになります。
公式の違いは分母がn-1(STDEV)かn(STDEVP)かの違いしかありません。まぁ感覚的に理解するなら、分母がn-1になるということはそれだけ結果が大きくなるわけで、つまりそれだけのりしろを多くもって推測に当たるというようなことになります。
AとBの違いがあるかないかという推測をする時、通常は標本同士の検証になるわけですので、偏差を余裕をもってわざとちょっと大きめに見るということで、それだけ確証の度合いを上げるというわけです。


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