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No.2ベストアンサー
- 回答日時:
示されているTmが正しければ、非特異的なバンドが出ることはあってもそれほどひどいスメアになるような温度ではないとおもいます。
すでにbufferにMgが含まれているのに、さらにMgを入れすぎてはいませんか?
アニーリングおよび伸長の時間が長すぎませんか?
dNTPの濃度が高すぎませんか(入れすぎていないか?)
この3点が原因になることが多いです。
初歩的なことですが、アガロースゲルには問題はないですね?マーカーがキレイに流れていれば問題ないです。
No.1
- 回答日時:
色々な原因が考えられますが、単純にプライマーのTmが低いだけかと
60℃以上は欲しいですね(templateが長い場合は65℃以上とか)、というより大抵アニーリングはTm-5℃ぐらいでやると思うんですが その点は大丈夫でしょうか
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