細菌DNAの単離、精製

細菌DNAの単離、精製の実験について、下記３問について教えてください。

１）以下の手順でDNAならびにタンパク質を得た場合、それぞれ(1)～(3)のどの層に配合されますか。

２）手順５のゆっくり混合する理由は『切断されやすいDNAの保護』という意味合いでよろしいでしょうか。

３）分離したDNAのある層に、二倍体のどんな液体を加えるとDNAが白い繊維状の沈殿となりますか。

１．培養した細菌を遠心する
２．菌体が沈殿する
３．エチレンジアミン四酢酸（EDTA)を加える
４．ドデシル硫酸ナトリウム（SDS)を加える
５．フェノールを加え、ゆっくり混合する
６．遠心する

↓

（結果）三層ができ、いずれかに単離したDNAが含まれる
(1)上層：透明な液体の層
(2)中層：白柔な個体の層
(3)下層：透明な液体の層

よろしくお願いいたします。

No.1 回答者： rakudasax 回答日時： 2011/08/18 19:26

１）以下の手順でDNAならびにタンパク質を得た場合、それぞれ(1)～(3)のどの層に配合されますか。

DNAは１の上層の透明な液体の層
タンパクは中層。


２）手順５のゆっくり混合する理由は『切断されやすいDNAの保護』という意味合いでよろしいでしょうか。

良いです。

３）分離したDNAのある層に、二倍体のどんな液体を加えるとDNAが白い繊維状の沈殿となりますか。

二倍体？
おそらくイソプロパノールの事ですね。

この回答へのお礼

ありがとうございました、周りに聞ける人が居ないので本当に助かりました。

DNAはてっきり下層に沈澱するものかと思いっていました。
DNAはタンパク質より軽いため、上層にくるのですか？それとも液体の色目が見極めのポイントですか？

３)の回答については全く存じ上げなかったので、また調べてみます。

また、この類の質問をすると思います、機会があればいろいろ教えてください！

お礼日時：2011/08/19 00:33

No.2 ベストアンサー 回答者： rakudasax 回答日時： 2011/08/19 13:26

>DNAはてっきり下層に沈澱するものかと思いっていました。

>DNAはタンパク質より軽いため、上層にくるのですか？それとも液体の色目が見極めの
>ポイントですか？

DNAとタンパク質の重量比ではないですね。
最初のEDTAにDNAがとけ込んでいます。
そしてフェノールを入れた後、タンパク質、その他諸々がフェノール層にとけ込みます。

遠心分離すると、DNAの解けている水槽は、フェノール層に比べて比重が軽いため、上層にきます。

３についてですが、DNAは塩の入っている液体に溶解している場合、アルコールを入れると析出するという性質を持っています。
アルコールは鎖の長いものの方がいいのですが、ブタノールになると極端に水に溶解しにくくなるため、一般的にはプロパノールを使用します。

ちょくちょくに見に来るので、いつでもどうぞ！
勉強がんばってくださいね。

この回答へのお礼

度々のご回答、またご親切なお言葉をありがとうございました。

なぁるほど、、
EDTA→DNA
フェノール→タンパク質
それぞれの性質によろ、ということですね。
奥の深い話ですので、勉強もなかなか追いつくことが大変です。。。。

勉強、頑張ります＾＾
回答者様もよい休日をお過ごしください！！

お礼日時：2011/08/20 23:23