Ligation high

　かなり前にまりますが（十年くらいかも）
Ligation highというLigation　kitを使用していたのですが
その当時　発売されたもので、画期的だったのですが
（室温で５分でライゲーションができるというのがうり）

　今その商品のプロトコールを見てみると
１６℃１時間となっています。
　
　以前の製品は　室温　５分というので
あまりコロニーが得られずに　ユーザーの
評判が悪く、プロトコールを改訂したのでしょうか？
　以前のプロトコールがあったことをご存知の方
いらっしゃいますか？（今の職場の人にそれを言っても
信じてもらえないんです）

No.2 ベストアンサー 回答者： geneticist12 回答日時： 2007/10/03 18:01

付着末端のligationでサブクローニング目的なら（ライブラリー作製のような目的ではなく、単一のインサートをクローニングする場合）、反応時間5分をうたっているキットは珍しくないです（PromegaのLigaFastやRocheのRapid DNA ligation kitなど）。

というか普通のバッファー、T4 DNA ligaseでも5分も反応させればサブクローンくらいならとれます（ただし、recovery効率を著しく下げる他の要因、たとえばDNAのUV被曝などがなければ）。

だいたい、付着末端のligationは最初の5分か10分くらいで8割方進んでしまいます。あとは反応時間を延ばすにつれてじわじわあがっていきます。
ligation highは16℃30-60分がプロトコールになっていますが、lambda HindIII断片の重合実験例では5分でほとんど完了することも示されています。

No.1 回答者： grumpy_the_dwarf 回答日時： 2007/10/03 17:49

東洋紡のLGK-101でしたら、今でも「5分で出た！」って泳動写真が

貼ってありますよ(参考URLの真ん中あたり)。新発売のLGK-201で
も、突出末端の場合の推奨反応条件に5～30分と書いてありますね。

記憶違いじゃなかったということで。

参考URL：http://www.toyobo.co.jp/seihin/xr/lifescience/pr …