抗体Aと結合するタンパク質をコードする遺伝子(cDNA)をクローニングする方法を教えてください。
実はこれはある問題で、「PCR、アミノ酸配列、プライマー、精製、データベース」の用語を用いて説明するように書いてあるのですが、インターネットで「cDNAクローニング」といれて検索しても、詳しく中身が書いていなくて、よく分かりません。
自分なりに考えてみると、「タンパク質を精製して、そこからcDNAを抽出し、それをプライマーを用いてPCRで増幅させ、塩基配列を調べて、・・・。」
問題に答えているのか、合っているか分からないですし、行き詰まってしまいます。
タンパク質を精製する方法や、タンパク質からcDNAを抽出する方法があるのかも分かりません。
長々と書いてしまいましたが、よろしくお願いします。
No.1ベストアンサー
- 回答日時:
cDNAって何だかご存知ですか?cDNAというのは、細胞内のmRNAを逆転写酵素(reverse transcriptase)をもちいて、その相補的なDNAを作ったときのそのDNA鎖のことです。
通常の転写はDNA→RNAの順ですが、この場合はRNA→DNAなので「逆」転写なわけです。「相補的」にあたるcomplementaryの頭文字をとってcDNAというのです。さて、具体的な方法ですが、細胞内からmRNAを抽出・精製してきます。この段階ではまだいろいろなタンパク質をコードしているmRNAが混ざっています。抗体Aをコードする遺伝子の塩基配列を、データベースを使って調べます。そして、その塩基配列からプライマーを作成して、逆転写酵素に、目的のDNAだけを作らせます。次に、別のプライマーを入れてPCRにかければ、そのDNAのみがどんどん複製されて、目的の遺伝子がクローニングされます。
この回答への補足
どうもありがとうございます。
おっしゃられるように、私の解答は、cDNAのことがめちゃくちゃですね。ありがとうございました。
Freeuserさんのお答えなのですが、
細胞内から抽出精製したmRNAがその後の工程の、どこに使われているのかが分からないので教えてください。すみません、お手数おかけします。
考えていたら、分かりました。
逆転写酵素を使うときに、mRNAを使うのですね。
すみません、冒頭で、「mRNAを逆転写酵素(reverse transcriptase)をもちいて、・・・」と書いてくださっていたのに。
実験をするうえでのいろいろな考え方も勉強できました。本当にありがとうございました。
No.2
- 回答日時:
ありがとうございます。
cDNAクローングもDNAクローニングも同じことなのですね。そっかー。
私の頭の中はがちがちになっているようです。
でも、いろいろ考えているうちに、研究のやり方は一つじゃないような気がしててきました。(いまさらです・・・。)大学で先生に言われる手法が唯一のものかと思っていました。
いろいろな方法の中で、効率的、経済的な手法を選ぶのが研究者の技量なのでしょうね。
もうちょっとこの問題、考えてみます。
どうもありがとうございました。
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