(蛍光分光光度計)励起波長の設定について
こんにちは、私は最近化学発光について研究をし始めた学生です。
先日、蛍光分光光度計を用いて化学発光のスペクトル測定をしていたのですが、その途中で疑問が1つ生じましたので投稿させていただきました。
励起波長を340nmと設定した場合、スペクトルは全く確認できず、ノイズのみのデータしか得られませんでした。
しかし、この励起波長を変化させているうちに、励起波長を750nmと設定した場合、明確なスペクトルが370nm辺りに確認できました。
なぜ750nmでスペクトルが確認できたのか、その理由が分かりません。
一応、750nmの励起波長を持つものはどこにも存在しない、と言う事だけは分かるんですが…。
ですので、ご存知の方に解説を頂けたらと思います。
蛍光分光光度計の測定条件は以下の通りです。
FP-6500 Xeランプ
バンド幅:5nm
励起波長:750nm(340nm)
開始波長:360nm
終了波長:600nm
走査速度:200nm/min
スペクトル測定に使用した試料は
ルシフェリン-ルシフェラーゼ混合溶液(Mg入り)
蒸留水
ATP溶液 終濃度 5mM
です。
よろしくお願いします。
No.1
- 回答日時:
ルシフェリン-ルシフェラーゼの化学発光を測定するのに,励起光を使うのは,ナンセンスな勘違いです.励起光を入射して発光するのは蛍光といいますが,化学発光とは別物です.化学発光を蛍光分光器で測定する場合,励起光無しで,蛍光側だけ動作させます.でも,分光器の光学系が暗かったら,さっぱり測定できないかもしれません.試料を暗所で見たら,肉眼で光っているのは見えますか?
>しかし、この励起波長を変化させているうちに、励起波長を750nmと設定した場合、明確なスペクトルが370nm辺りに確認できました。
アンチストークス蛍光の可能性がないとは言いませんが,たぶん,750nmの励起光に混じっていた375nmの2次回折光じゃありませんか?ピーク形状は鋭くありませんか?
この回答への補足
すみません。情報が足りませんでした。
実は励起光は出しておらず、蛍光側だけを動作させています。
にもかかわらず、励起波長を750nmに設定したら370nmでピークが見られました。
励起光源を出していないのに励起波長の設定をいじったらピークが見られたっていう点に大きな疑問があります。
あとは、装置内に試料セルを入れているので、分光器の光学系は暗いです。
暗所で光っているのは見えませんでした。
以前におかしいとは思ったので一応ルミノメーターで確認した所、ATP添加前(0.208)と添加後(9999以上)で数値が全然違ったために「なら大丈夫かな」と認識していました。
二次回折光かどうかはまだ調べてないので分かりませんが、ピーク幅は15nmくらいです。
多分、そこまで鋭くは無い方だと思うのですが…
すみませんが、思う所があれば回答を頂けると助かります。
No.2ベストアンサー
- 回答日時:
研究者の姿勢として、研究内容をこのような掲示板で公開するのは、問題があります。
学生なら、指導者がいるハズで、その人を無視していますから、私の研究室なら追放です。教えてgooにも、「課題の回答はダメ」というのなら、「研究内容の回答はもっとダメ」と2度ほど連絡したのですが、理解してもらえません。この管理者が科学というものを理解していないようで・・・。これは質問者も同じです。私も、学生時代に同じ失敗をしているのですが。予想と違うことは、新発見のきっかけになるかもしれない、というのは学んでいると想います。質問者が理解できない事実なら、これに該当します。実際には、10回で1回くらいモノになる(=論文が書ける)かどうかですが。
発光分析と蛍光分析は、区別できていますか。発光分析は、光を照射しなくても光っている場合。蛍光分析は、光を照射し(=蛍光波長)、それより低いエネルギー(=長い波長)の蛍光を出すことを利用しています。ですから、750nmで照射し、370nmでの蛍光というのは、蛍光の原理に反します。重要なことなのか、質問者の力不足なのか、他の方の回答は理解できてイマンが、それなのかは分かりません。
私の場合は、100%測定条件の設定ミス。紫外部をガラスセルで測定しようとしたこともあります。ミスの積み重ね、恥の上塗り、によって、学生はどこをミスるのか予想でき、良い経験になっています。
聞くは一時の恥、でも、研究内容を掲示板で訊くのは、研究者として許されることではありません。指導者に訊きましょう。
お探しのQ&Aが見つからない時は、教えて!gooで質問しましょう!
似たような質問が見つかりました
- 物理学 水銀原子の基底状態と第2励起状態間のエネルギー差は9.8eVである。第2励起状態から基底状態へ電子が 1 2023/07/19 23:44
- 物理学 励起波長と蛍光波長についてです。 励起波長を吸収し蛍光波長の光を蛍光する仕組みと、 蛍光の際に他のエ 2 2023/02/16 10:24
- 化学 メチレンブルー溶液を使用して活性炭による吸着量の測定を行いました。 どうしてもわからないところがある 1 2022/06/29 00:43
- 化学 メチレンブルー溶液を使用して活性炭による吸着量の測定を行いました。 どうしてもわからないところがある 3 2022/06/29 00:47
- 物理学 水素原子のエネルギーは En≅-2.16 (aJ)/n2 とあらわすことができる。 aJ=10-18 1 2022/12/19 07:32
- 物理学 光の性質について少し教えてください 7 2022/11/08 20:31
- 大学・短大 多原子分子のスペクトルについて 2 2022/10/27 16:12
- 物理学 100Wの蛍光灯の問題が分かりません 2 2023/01/22 19:52
- 物理学 特殊相対性理論を、完全否定に成功~ガンマの数式は、成立しない。 2 2023/03/08 19:30
- 工学 半導体 光減衰法による少数キャリアのライフタイム測定で周波数を変えたときの検出波形(縦軸出力電圧、横 1 2023/05/16 19:15
おすすめ情報
デイリーランキングこのカテゴリの人気デイリーQ&Aランキング
-
Si-C結合を切るのに必要な光の...
-
赤色光と青色光の読み方は、何...
-
色度(x,y)をスペクトルデータか...
-
弦の振動の問題で おもりを変え...
-
アルミホイルはエックス線を通すか
-
検量線に吸収極大波長を用いる...
-
PETボトルは紫外線を通しますか?
-
何故、白より黒の方が紫外線の...
-
電磁波の周波数と熱について教...
-
悪霊を追い払うにはどうしたら...
-
何か面白いことを言っているわ...
-
波長が合うとはどういう事か
-
30℃の空気中の音速は何m/sか。...
-
太陽光と同じか、それに近い光...
-
紫外・可視吸収スペクトルについて
-
バルマー系列の最短波長と最長波長
-
クオリアとは何か
-
DNAの波長について
-
分光光度計の波長変更
-
なぜ紫外線量が赤道直下のイン...
マンスリーランキングこのカテゴリの人気マンスリーQ&Aランキング
-
磁性鍋・・・マイクロ波が赤外...
-
検量線に吸収極大波長を用いる...
-
アルミホイルはエックス線を通すか
-
PETボトルは紫外線を通しますか?
-
クフ王のピラミッド内部構造は...
-
月光に紫外線は?
-
TLCスポットのUV発色について
-
弦の振動の問題で おもりを変え...
-
250nmのUV-Cを直視してしまった...
-
吸収スペクトルと蛍光励起スペ...
-
超低周波発生装置を作るにはど...
-
色度(x,y)をスペクトルデータか...
-
レイリー散乱とトムソン散乱な...
-
軽元素の定量について、EDSやXR...
-
電磁波の周波数と熱について教...
-
バルマー系列の最短波長と最長波長
-
スペクトルとは何ですか?簡単...
-
光はなぜガラスを通過するので...
-
DNAの波長について
-
ソーラーパネルは赤外線と紫外...
おすすめ情報