ELISAプレートの洗浄法について教えてください．

こんにちは．初めて質問します．
kitではなく，自分で抗原（細胞株）をプレートに
coatingしてELISAをしているのですが，手動で
プレートを洗浄する方法を教えて下さい．

先輩から，プレートが割れるくらい強く何度も
たたきつけて洗えと言われるのですが，そこまで
必要なのかなかなか信じられません．要は洗浄液
が除去できればいいと思うのですが，デカントした
後，軽くキムタオルの上で吸水させるだけでは
やはり不十分なのでしょうか？
また，抗原が細胞株だからかなのか分かりませんが，
洗浄液はD-PBSで，tweenなどが入っていません．
（ラボのプロトコールでそうなっています．）
tweenなど入れると，細胞表面抗原などに悪影響
なのでしょうか？

以上，よろしくお願いします．

No.3 ベストアンサー 回答者： kexe 回答日時： 2004/01/13 00:27

ELISAをキットなど用いずに行っているものです．

ただ私は蛋白質をそのままコーティングしているので
畑違いだと思います．ですがどの程度違うのかわからないので
一応書き込みだけしておこうと思い、書き込みました．
（ですから専門家ではなく経験者にしました）
あとはTweenを0.05%で使っています．
入れるか入れないかで結果が大きく異なる場合もありましたのですが、、、
悪影響があるかもしれないのでは入れられませんね

あくまでも蛋白質をコートする場合であればの話ですが
そこまでたたかないでも上手くいっています．
というよりたたかないでもうまくいきます．
昨年末も大学での模擬授業のためにきた高校生にやらせて
たいていの子が成功しました．
ヒト血清そのままをもちいて
花粉症の診断のためELISAを行ったこともありますが
若干の変更でたいていがうまくいきます．

一点だけ以前ある抗原と抗体にだけ
どうしても綺麗なデータが出なかったとき、変えたのが二次抗体でした．
抗原と二次抗体の相性はあると思います．
標識つきモノクロ抗体を使っているのでしたら関係ない話ですが

お役に立てる話であればいいのですが

この回答へのお礼

書き込みありがとうございます．
私の場合も細胞をコンフルエントまで増やしてから0.25%グルタルアルデヒドで
固定して使用していますので，参考になりました．

お礼日時：2004/01/15 09:38

No.2 回答者： HATABO7013 回答日時： 2004/01/08 20:44

私は仕事で市販のＥＬＩＳＡキットをよく使う者です。

＞要は洗浄液 が除去できればいいと思うのですが，
＞デカントした 後，軽くキムタオルの上で吸水させ
＞るだけでは やはり不十分なのでしょうか？

私の経験上，これでは不十分です。
叩きつけて水分を切るのは「洗浄液を除去する」というよりかは，「洗浄前まで入っていた液体の影響を極限まで少なくする」ことが必要だからです。
洗浄液を叩き取るペーパータオルでさえ1回1回捨てて，絶対使い回ししません。

しかも，デカントで水分を切るようなことをすれば，各ウェル間，各プレート間での誤差も非常に大きくなると思います。

ただでさえＥＬＩＳＡは誤差の出やすい反応ですので，少々神経質になり過ぎるくらいがちょうど良いと私は感じています。

No.1 回答者： oolong_tea13 回答日時： 2004/01/08 14:42

こんにちは．

私もたくさんELISAやEIAやりました．
プレートをパンパンたたくことの意味は，
おっしゃるように洗浄液を残さないためです．

ただ，ELISAのKITを作っていた人間が中途採用で入社してきて，
世間話のついでに聞いてみたところ，
ものによっては，非常にデリケートなものもあり，
親の敵をとる勢いでたたいて問題ないことの方が多いのですが，
それではだめなものもあるようです．

残念ながら，豪快にたたいて良いか悪いかを確かめる方法はなく，実際に豪快にASSAYをやってみて，Standardがきれいにひけずに一部の吸光度がフラットになったりするようであれば，固着が弱いキットと判断するしかないようです．

ただ，神経質になりすぎるのもどうかとは思いますけどね．

この回答へのお礼

ご回答下さりありがとうございました．
オートウォッシャーの使用でこの問題を解決できれば一番いいなと思っているところです．
”豪快たたきつけ法”は私にとってかなり難しく，また枚数が多い時は大変ですよね．
それにしても，あくまで豪快にされるのがやはり一般的なんですね・・・

お礼日時：2004/01/08 18:10