逆相HPLCで移動相が白濁してしまいます。追記欄の対策は既にとってありますが、依然白濁が見られブランクランでゴーストピークが現れてしまいます。どうか対処法ご教授くださいませんでしょうか。お願い致します。
【条件】
流速 0.5 ml/min
温度 室温
移動相 A液:水+0.1% TFA
B液:アセトニトリル+0.1% TFA
RUN PROGRAM 0-10min A 100%
10-40min B 0-50%
40-50min B 100%
カラム ODSカラム
波長 220nm,280nm
です。
【考えられる原因】
(1)前使用者が微生物破砕粗製生物をアプライしていた。⇒この時のとけ残りがピークとして現れている?
(2)前使用者がカラムをA液(水+0.1%TFA)で保存していた。⇒バクテリアの繁殖か?
(3)前使用者の有機溶媒がメタノールだった。⇒メタノールとアセトニトリルが混和して白濁か?(洗浄は十分したと思いますが…)
【問題点】
廃液が白濁する、ゴーストピークがいつまでも現れる(特にB液 100%のときが激しく)
【既に取った対処法】
(1)100%メタノールでカラム洗浄(一晩)
(2)100%アセトニトリル+0.1%TFAでカラム洗浄(一晩)
※HPLCの廃液は白濁しますが、試しに移動層A液とB液を試験管で混和しても白濁は見られませんでした
A 回答 (1件)
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No.1
- 回答日時:
誰も答えないので・・・
あまり詳しくありませんが、単に水溶性のものが溶け出したが、、アセトニトリルに不溶のため、微粒子になって析出、白濁、と言うことでは?
以前使用したマトリクスの溶解性がどのようなものかはわかりませんが、水80%-アセセトニトリル20%ないし水50%-アセセトニトリル50%程度で洗浄してみてはいかがでしょうか?
それでダメならメタノールに切り替えてみるとか。
いずれにせよ溶媒リッチでは、結構カラム内部で塩の析出等、よくあることです。(ご存知だとは思いますが)
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