電気泳動のバンドが出ずに困っています。
現在マウスの肝臓組織からDNAの抽出→PCR→電気泳動によるバンドを見る実験を行っています。
ポジコンは電気泳動もPCRも出るので、DNA抽出の際に原因があると考えています。
DNA抽出のプロトコルは
①界面活性剤(DNA ZOL)を注入しホモジナイズ
②10000xg10分遠心後水層を分離(DNA層の分離)
③水層200μlに対し100μlの100%ethanol(エタ沈)
④5000xg10分遠心後ethanolを捨てる
⑤75%ethanolを注入し(リンス)
⑥5000xg10分遠心
⑦もう一度ethanolを捨て注入し5000xg10分遠心
⑧ethanolを捨て水に溶かす。
試してみたのは
・サンプル量を減らしてみる(②での不純物を減らす)
・遠心のgを増やし、収量をあげる
・すべて氷上で行う。
③の段階で白いものが出てくるのでDNAは出てるのではないかなと思っています…。
サンプル量が多いと黄色いものも混じっています(脂質?)
②で不純物が混入するとPCRって出ないものですかね?(わずかでもDNAがあればPCRで増幅されると思うのです…。)
あと、たまにバンドが出るときがあるので余計にわからないです…。
写真は両端がポジです
No.2
- 回答日時:
ポジコンと何の?
単にDNAがしっかり解けてないだけではないかと。
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