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ミカエリスメンテン式とラインウェーバー・バーク式

ミカエリスメンテン式とラインウェーバー・バーク式

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質問者：emynya
質問日時：2007/11/02 16:38
回答数：1件

こんにちは。
基本的なことかもしれないのですが、お願いしますm(__)m
先日、酵素反応の実験をしたのですがその際に
「ミカエリスメンテン式では、基質溶解度などの制限より最大反応速度の近似値しか分からないので、ラインウェーバー・バーク式から数値を
求める」という説明がありました。
ですが、なぜミカエリスメンテン式では近似値しか求められないのかということがよく理解できません。
どなたか、教えてください。

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回答 (1件)

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No.1ベストアンサー

回答者： c80s3xxx
回答日時：2007/11/03 00:05

その文章はまったく正確ではありません．

基質濃度無限大の時の反応速度は現実には測定できません．なので低濃度での測定値からの外挿で求めるわけですが，基質濃度に対して反応速度をプロットしたグラフではどこが飽和収束値になるのか，あいまいにしか推定できません．一方，Lineweaver-Burk 形式でプロットすれば，直線を外挿して得たy切片を読み取ればよいので，数値を求めやすくなります．
ただし，Michaelisis-Menten の式のままでも，データに対して直接カーブフィッティングをきちんとやれば Vmax は求められます．Lineweaver-Burk プロットから求めた場合と数値はたぶん一致しませんが，それは誤差を含む測定値の統計処理の問題にすぎず，本質的には同じ値が出てきます．
しかし，カーブフィッティングが簡単にできるようになったのは，コンピュータが普及してからの話であり，昔は何らかの形で一次関数に変換して作図的に読み取るのが，精度もそこそこ高く，また計算の手間も少なかったのです．
直接的なカーブフィッティングが容易にできる現在でも Lineweaver-Burk プロットや Eadie-Hofstee プロットなどは行われますし，それを軽視してはいけないのは，Michaelisis-Menten 式に対する適合性をもっとも直感的に判断できるからです．Vmax や Km 値を求めるという観点ではすべてのやり方について統計的な意味での一長一短があり，反応速度等をどのようにはかったかという実験作業上の問題と切り離すこともできません．

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この回答へのお礼

わかりやすい回答ありがとうございます。
実習書に書いてあるような文章でも、正確じゃないこともあるのですね。
勉強になりました。
本当にありがとうございますm(__)m

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お礼日時：2007/11/03 14:44

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Lineweaver-BurkプロットによりKm値とVmaxを求めるやり方がわかりません。教えてください。

Aベストアンサー

ミカエルス・メンテンの式は、基質濃度[S]が一定の場合に成立します。
しかし、実験では酵素によって基質が分解されて、経時的に減少するため一定に保つことができません。
参照サイトの説明にあるように、実際は基質の分解が10%以下の条件を便宜的に用います。
たぶん実験に用いた反応時間は、基質の分解が10%以下という設定になっていると思います。
生成物のモル吸光係数がわかれば、その濃度がわかるので、基質濃度と比較すれば分解率が何%か計算できます。

で、反応速度の実験では基質の分解が10%以下の時の吸光度の増加(ΔAbs)を便宜的に「初速度」と扱います。
真の初速度は求めることができないからです。
速度には、○○/時間、の単位が必要ですから、得られた吸光度が測定時間内に直線的に増加したと考えて、
吸光度÷測定時間＝ΔAbs/min (sでもhでも良い)となります。
また生成物の濃度が吸光度から計算できるなら、M/minの方がベターです。

さらに聞きたいことがあれば、遠慮なく質問して下さい。

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1⇒2.5
2⇒4.0

また、反応に酵素阻害剤（I）が存在したとき、次のデータが得られた。
この阻害剤の阻害様式を答えなさい。

基質濃度S(mM)⇒反応速度V(μM/min)
1⇒2.0
4⇒5.0

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